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细胞转瓶培养细胞的操作方法
发表日期:2024-11-14

细胞转瓶作为一种独特的细胞培养装置,已广泛应用于多种贴壁细胞的培养,由细胞转瓶培养的细胞如Vero细胞,HEK 293细胞,CAR-T细胞、MRC5等,以下是细胞转瓶培养的操作步骤:

1.准备培养基:选择适当的培养基,并将其预先加热和平衡至适当的温度。通常,培养基中还包含补充物(如生长因子、抗生素等)以提供细胞转瓶培养细胞生长所需的营养物质和环境条件。

2.消毒操作:在进行培养前,确保工作环境和所用工具的无菌。使用合适的消毒剂(如70%酒精、消毒剂溶液等)对操作区域进行消毒,然后在无菌条件下打开细胞转瓶的包装。

3.倒出培养基:倒出适量的培养基,通常约为转瓶容量的一半到三分之一,注意避免产生气泡,确保细胞转瓶内底部均匀覆盖培养基。

细胞转瓶培养

4.细胞接种:将要培养的细胞悬浮于预先准备好的培养基中,使细胞密度达到所需的浓度。在培养期间,可以根据所需的细胞生长情况调整细胞接种密度。

5.环境条件:根据细胞转瓶培养细胞的特性,提供适当的培养条件。这可能包括特定的温度(通常为37°C)、湿度和CO2浓度。将转瓶放入恒温培养箱或细胞培养箱中,并根据要求调整相应的环境参数。

6.培养和观察:在培养过程中,定期观察细胞的生长情况、形态和健康状态。根据需要,可以进行培养基的更换和细胞的传代。

7.收获细胞:在细胞生长至明显汇合时(5~6天),移出培养液,加入0.25%胰蛋白酶,并滚动细胞转瓶以收获细胞。洗去胰蛋白酶,加入新鲜培养基,可转入扩大再培养。

需要注意,以上步骤提供了一个基本的细胞转瓶培养操作指南。具体的细胞培养条件和技术细节可能因细胞类型的不同而有所差异。因此,在进行细胞转瓶培养之前,请参考相关的实验室方案、技术手册或专业指导,以确保实验的成功和细胞的健康生长。

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